图一：ATCC中Caco-2细胞形态
Caco-2(人结直肠腺癌细胞)分离自一位72岁男性直肠原位癌。当细胞长满时，表现出典型的肠细胞分化的特征。Caco-2细胞表达维生素A酸结合蛋白Ⅰ和视黄醇结合蛋白Ⅱ，角蛋白阳性。
本文为大家介绍Caco-2生长特性和常见问题解决策略。
生长特性
呈岛状生长，Caco-2细胞群的边界光滑。
图二：Caco-2细胞边界不清晰x
空泡多
Caco-2细胞群中常常含有巨大的空泡，这是细胞本身的特性，属于正常现象。
图三：Caco-2细胞空泡多x
难消化
Caco-2细胞与细胞间连接紧密，细胞难以消化解离。生长时间越长，细胞间连接越紧密，消化时间越长。消化时间为5-10分钟，该细胞难以被吹散为单个细胞，当细胞能够被吹散为小的细胞团块，即可终止消化。
图四：Caco-2细胞难消化x
生长周期长
Caco-2传代周期较长，倍增时间约为72h。Caco-2贴壁和生长都较为缓慢。按1:3传代的情况下，约一周传代一次。
Caco-2有少量发亮的细胞漂浮或黏附在细胞克隆上，是正常的，随后会进入克隆并正常生长。所以避免频繁观察细胞，可以减少漂浮细胞产生。如果细胞随着培养过程，漂浮得越来越严重，甚至大块儿飘起，就要检查培养基成分、培养环境是否出现异常。细胞密度越高，消化时间越长。
血清质量差异可能引起细胞状态变化，建议选用高质量的胎牛血清。
培养条件
培养体系：DMEM,HIGHGLUCOSE10%胎牛血清（南美级别）。
传代比例：不高于1:3传代（培养面积比）。
传代方式：消化5~10分钟。
换液频率：每周换液1-3次。
倍增时间：3~4天（ATCC）；~80小时(DMSZ)；~32小时(PBCF)；~60-70小时(CLS)。
冻存液配方：DMEM,HIGHGLUCOSE+10%FBS+10%DMSO。
培养要点
该细胞贴壁较慢，在复苏或传代初期，若有许多细胞或细胞碎片漂浮为正常现象，为避免在细胞附着初期干扰细胞，建议到第三天才换液。待细胞贴壁后，一周即可长满（1:3传代），若细胞生长过慢，可适当调整血清浓度到20%。
常见问题
Lisa
细胞不贴壁怎么办？
Caco-2培养基里添加的胎牛血清比例为10%，当血清比例降低，贴壁性下降时，补充胎牛血清至20%，继续培养1-2天，细胞即可贴壁。检查培养基是否偏碱（呈紫红色），偏碱的培养基可能导致细胞无法贴壁。
赛库生物
Lisa
漂浮细胞多怎么办？
有少量发亮的细胞漂浮或黏附在细胞克隆上，是正常的，随后会进入克隆并正常生长。所以避免频繁观察细胞，可以减少漂浮细胞产生。如果Caco-2细胞随着培养过程，漂浮得越来越严重，甚至大块儿飘起，就要检查培养基成分、培养环境是否出现异常了。
赛库生物
注意事项
1、细胞贴壁慢特别是刚复苏时，一般2-3天贴壁展开，会有空泡。
2、细胞在传代细胞中，注意消化散，否则难以贴壁。
3、成团生长，细胞密度越大，表面空泡黑点越多。
4、一般细胞长至80%传代，细胞成片，其实密度很大。
5、细胞生长太满对细胞状态影响严重，传代后易碎，死亡。
6、细胞生长时间越长，消化时间越长。
